荧光显微镜滤光片的性能，什么是高性能滤光片？

       对于高性能滤光片,应该是频幅选择性范围窄、光谱特异性强才能达到荧光光度分析的高水平的需求，这种性能若是用光学物理量表示的话,就是半波峰宽度和透光度的数据。以Leitz 公司的两张绿色滤光片为例来比较这些物理量的具体参数,图1所示的绿色玻璃滤光片的波长范围为400～600 nm,透光度为60%,半波峰宽度为80 nm。从透射曲线的波峰的中腰部(1/2高度)向X轴(波长)引两条垂直线,两线间的宽度就是半波峰宽度,它能准确地反映出滤光片的选择性波长的质量。

        图2所示为绿色干涉滤光片的透添射曲线，这种滤光片的波长选择范围为480~520 nm，透光度为60%，半波峰高度（HBW）为20 nm.从两张透射曲线图可以看出，同样是绿色滤光片，透光度都是60%的条件下，后者的半波峰宽度仅为20nm,其相对能量几乎集中在500nm处的很窄范围内，证明绿色干涉滤光片是窄频谱、短波长、光谱特异性很强的高性能滤光片。

          用荧光显微技术在观察受激而发光不强的样本时，往往需要给予最强光源才能得到所需的荧光效应。为此需要最强激发高性能宽频谱干涉渺滤光片，这些滤光片所透射的波长范围内荧光效应最清楚。荧光素能否激发出最强、最鲜艳的荧光，最关键的因素就是正确选配与每一种荧光素相匹配的滤光片组。

        要掌握每种荧光素所发射的荧光光谱波峰，才能正确应用滤光片的特征性激发光谱波峰、阻挡光谱波峰和分色光谱波峰。例如异硫氰酸荧光素的激发光光谱波峰在490nm,而发射荧光的波峰在525 nm,二者之间只有35 nm之差(见图4)。

为了得到异硫氰酸荧光素最强最鲜艳的荧光效应,就应当选择一个透射光谱的波段为450～490 nm 的蓝色激发片或激发滤光片组,对应这种激发片应选择一个LP515长波阻挡滤光片,再附加一个截止点为510 nm的色光分离反射滤光片,即能保障激发光和发射荧光的波峰分离,这就是说为了得到异硫氰酸荧光素的最佳荧光影像,就要选配LP450＋KP490、RKP510、LP515(见图4)。