焦深(depth of focus)又称垂直鉴别率或景深,是指物镜对高低不平的物体能清晰分辨的能力,它与物镜的数值孔径成反比,物镜的数值孔径越大,其焦深越小。在物镜的数值孔径特别大的情况下,显微镜可以有很好的分辨率,但焦深很小。对于金相显微镜来说在高倍放大时,其焦深很小,几乎是一个平面。这也是把金相试样制备成平坦表面的缘故,当显微镜用于高倍观察时,由于焦深小,只有在金相试样表面高低差较小时,才能清晰成像。因此,高倍观察所用的试样应浅浸蚀。
显微镜焦深D的计算公式为:
D=K*n/M*NA
式中K——常数.约为240um;
n————被检物体周围介质的折射率;
M——总放大率;
N——物镜的数值孔径。
由公式可知:
(1)焦深与总放大倍率及物镜的数值孔径值成反比,可见放大倍率愈高,数值孔径值愈大,焦深D则愈小。
(2)焦深与分辨率相反,分辨率高则焦深变小。因此,在使用高倍物镜并在高分辨率下观察时,由于焦深小,必须运用细调焦装置上下调节,以观察被检物体的全层,弥补焦深小的缺陷,但具在进行显微摄影时,则应当尽量利用焦深大的物镜。如40×物镜,数值孔径有0.65.0.70,0.85,0.95四种类型,观察时,选用NA为0.95的物镜,可得到好的观察效果,而显微摄影时可根据样品的组织情况适当选用NA值小的物镜,才能得到比前者焦深大的效果