将显微镜的明场照明聚光镜的中心遮拦,并令照明光束的最小孔径大于物镜孔 径,则光源经聚光镜发出的光线无法进入物镜,视野将一片黑暗。但是,如果标本面 上存在物体,那么,物体的衍射光在黑暗的背景上形成一个明亮的像,这就是暗场照 明的原理。 利用暗场照明技术可以观察到明场照明看不到的物体,也可以观察到细菌、细胞 等活体标本,由于成像对比度好,即使小于物镜分辨率的微粒,每个微粒的衍射光在 暗场中形成各自的彩色衍射光环。因此观察者仍能觉察到微粒的存在,这也是超显微 术的一种方式。 透射式暗场照明聚光镜具有超大的数值孔径,光学系统如下图 所示。它适用于 生物显微镜,用来观察有规则的物体、具有线性结构的物体、以及各种活体细胞。 当物镜数值孔径很大时,照明的直射光易于直接射入视场,因此聚光镜中必须带 有可变孔径光阑,缩小光阑可以阻止直射光射入视场。